山梨医科大学雑誌　第14巻1号　017-025(1999)

＜原著＞酵素免疫測定法を用いたヒト胎盤組織中
basic fibroblast growth factorの測定

長坂久司

抄 録：Basic fibroblast growth factor（bFGF）は強力な血管新生因子であるが，そのコードする遺伝子中にシグナルペプチドを欠いているため，定量には組織を直接抽出精製しなければならず，実用性に乏しい。そこで，2種の異なる領域を認識するモノクローナル抗体によるサンドイッチ酵素免疫測定法（EIA）を用い，ヒト胎盤から一定の抽出過程を加えたbFGF定量法の開発を試みた。
その結果，本法でのbFGFの検出限界は400 pg/mlであり，800 pg/ml〜25.6 ng/mlの測定が可能であった。再現性試験での測定内変動係数は，同時再現性で平均5％前後，日間再現性で平均10％前後であった。添加回収試験では回収率80〜100％であり，希釈試験での希釈曲線は原点に収約する直線性を示した。バイオアッセイにてED50となるbFGF濃度は合成ヒトbFGFが約100pg/ml，粗抽出液も約100pg/mlと同じ値となった。精製試料でのRIAとEIAの測定値は満足のいく相関性が認められた。以上より本法は少量の生体組織にも応用できうること，かつ再現性と簡便性に優れていること，また測定値が生物活性とも良好な相関をもつことが判明した。本法にてヒト胎盤内bFGFを測定し，106±18 ng/1g wet tissueという結果を得た。

キーワード　basic fibroblast growth factor (bFGF)




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