山梨医科学雑誌　第18巻4号　087-094(2003)

<原 著>
新しい光感受性物質（Na-Pheophorbide a）を用いた
培養肺癌細胞に対する光線力学療法の基礎的検討

井 上 秀 範，高 橋 渉，小 林 正 美，佐々木 政 子，
吉 井 新 平，多 田 祐 輔，松 本 雅 彦

要 旨：【目的】新しい光感受性物質Na-Pheophorbide a（Na-Phde a）を使用した腫瘍内直接注射によるPhotodynamic therapy（PDT）を開発するため，Na-Phde aの特性をin vitroにて検討し，臨床応用が可能であるかを明らかにすることを目的とする。
【対象・方法】肺扁平上皮癌細胞株（RERF-LC-AI，以下腫瘍細胞）を使用し，Phde aの吸光度曲線を作成した。次に腫瘍細胞にNa-Phde aを種々の濃度および時間で作用させて細胞内Phde a濃度を求め，その結果をもとにNa-Phde aを取り込ませた腫瘍細胞に対しハロゲン光によるPDTの殺細胞効果を測定した。さらに腫瘍細胞にPhde aを取り込ませた状態での蛍光顕微鏡観察を行った｡【結果】腫瘍細胞内のPhde a濃度曲線はおよそ4時間で飽和状態に達し，0.04 mg/ml以上の濃度ならば腫瘍細胞内濃度は約1.4 pg/cellと最高濃度に達した。そこで0.04 mg/mlのNa-Phde aを種々な時間で腫瘍細胞に作用させPDTを施行したところ，Na-Phde aを1時間以上作用させることで，コントロールとの相対生存率は3％以下となり有意に腫瘍細胞は死滅した（p＜0.01）。さらに蛍光顕微鏡観察ではPhde aは1時間から4時間程度で腫瘍細胞内に強い集積を認めた。
【結語】Na-Phde aは1.4 pg/cellの濃度があれば，腫瘍細胞に対しin vitroのレベルで十分な殺細胞効果が得られた。以上よりNa-Phde aを使用しPDTを行う方法は臨床応用可能であると思われた。

光線力学療法，Na−フェオフォーバイドa，光感受性物質，レーザー，肺扁平上皮癌細胞



Basic Study of Photodynamic Therapy Using New Photosensitizer (Na-pheophorbide a)
for the Human Lung Squamous Carcinoma Cell Line

Hidenori INOUE, Wataru TAKAHASHI, Masami KOBAYASHI, Masako SASAKI
Shinpei YOSHII, Yusuke TADA and Masahiko MATSUMOTO

Abstract: Purpose: Na-Pheophorbide a (Na-Phde a) is a newly developed photosensitizer that can be used in the Photodynamic therapy (PDT) to treat lung cancer, employing local injection method. In this study, we evaluated the basic characteristics of Na-Phde a and it痴 effects on the lung cancer cell in PDT.
Material and Methods: The human lung squamous carcinoma cell line (RERF-LC-AI) was used in all experiments. After the determination of the absorption curve of Na-Phde a, we measured the intracellular Phde a level in the cul-tured cell which had been cultured with Na-Phde a content culture solution at various densities and times. Then, we evaluated the cytotoxic effect of PDT for Na-Phde a loaded lung cancer cells, and also observed the distribution of Na-Phde a in the tumor cells with the fluorescence microscope.
Result: The intracellular Phde a density reached to the plateau (about 1.4 pg/cell) after 4 hrs. In this situation, the extra cellular Na-Phde a density was 0.04 mg/ml or more. The survival rate of the cancer cell became 3％or less by Na-Phde a-mediated-PDT (p＜0.01). Na-Phde a stains could be observed in the tumor cell within 1 hr.
Conclusion: In our in vitro study, it has been proved that Na Phde a has adequate cytotoxic effects on the human lung squamous carcinoma cell line.

Key words Photodynamic therapy, Na-Pheophorbide a, Photosensitizer, laser, human lung squamous cell


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